第二章 苹果苗木贮藏生理特性的研究

2.1 材料与方法

2.1.1 试验地点

本试验在陕西省宝鸡市海升农业有限公司冷库进行。宝鸡市干阳县南寨镇位于陕 西省关中地带，属于暖温带半大陆性气候，当地气候条件适合苹果自根砧大苗和苹果 砧木繁育。海升公司冷库面积宽阔，每年有一百万株苹果苗木贮藏其中，拥有先进的 温度制冷和加湿技术，环境湿度可以控制到99.9%，为试验的进行提供了可靠地环境条件。

2.1.2 试验材料与处理

试验所用材料取自海升公司繁育的一年生苹果矮化自根砧嫁接苗和砧木，苹果矮 化自根砧嫁接苗是2018年春季嫁接，所用砧木是M9-T337，于2017年春季定植，嫁接的品种是嘎啦，苹果砧木的繁育方式是采用压条繁殖，品种是M9-T337，一年生砧木。试验材料要求大小和规格一致，根系较密，且表面无损伤的裸根苹果苗木，每组处理60 株苗木，设置三个重复，每次选取三棵苗木取样。试验要求温度为1℃，相对湿度 90%。锯末来自海升公司，新高脂膜生产自陕西渭南促花王科技有限公司，抗蒸腾剂生产于四川国光农化股份有限公司，试验药品均安厂家指定要求使用。

2.1.2.1 高脂膜和抗蒸腾剂使用方法

湿锯末处理组苗木须每隔三天对苗木表面喷洒一定的水分。

新高脂膜（主要成分：高级脂肪酸乳化液=70%）是一种植物表面保护剂，是以高级脂肪酸与多种化合物科学复配，化学性质为PH值中性，可保温、保湿、防病驱虫。母 液稀释稀释800倍，使用喷雾器每隔20d 对苗木喷施1次，连续喷3次。

抗蒸腾剂（主要成分：N+P₂0₅+K₂O>=200g/l，腐殖酸=40g/l），由环保型生态材料 -高分子网状结构材料合成，能够封闭植物表面气孔，延缓代谢，使用时稀释800倍喷 施苗木，使用喷雾器每隔3天喷一次，连喷3次。

2.2 试验测定项目及方法

2.2.1 苗木相对含水量的测定

将新采的植物枝条迅速剪成小块，每处理分成两份，每份三个重复，每个重复称 取1g(Wf)，一份于150℃烘箱中烘烤1h，然后称此时的重量(Wd)，另一份放入蒸馏水中浸泡70min，当达到恒重时称取此时重量(Wt)。

相对含水量=(Wf-Wd)/(Wt-Wd)*100%     (2-1) 

2.2.2 苗木可溶性糖的测定

蒽酮比色法，称取根样品0.5g，放入小培养皿(空白试验先加硫酸再加入根样品， 其他操作相同)，加入0.4%TTC溶液和磷酸缓冲液的等量混合液10ml，把根充分浸没在溶液内，在37℃下暗处保温1h，此后加入1mol/L硫酸2ml，以停止反应。

把根取出，吸干水分后与乙酸乙酯3~4ml和少量石英砂一起磨碎，以提出TTF。把红色提出液移入试管，用少量乙酸乙酯把残渣洗涤二至三次，皆移入试管，最后加乙酸乙酯使总量为10ml，用分光光度计在485nm下比色，以空白作参比读出光密度，查标准曲线，求出四氮唑还原量。

计算将所得数据带入下式，求出四氮唑还强度。

可溶性糖含量=(C*V1*D/W*V2*106)*100     (2-2)

式中：

C-标准曲线上查出的糖含量(µg)；

V1-提取总体积(ml)；

V2-测定总体积(ml)；

D-稀释倍；

2.2.3 苗木根系活力的测定

原理及测定方法：2，3，5-三苯基氧化四氮唑简称四唑或TTC。因脱氢酶活性与细 胞呼吸有关，四氮唑的还原数量也就与根系活力强弱呈正相关。因此，可根据红色深 浅所反映的脱氢酶活性作为根系活力指标。

2.2.4 苗木根系相对电导率的测定

取生长一致的植物根系的根尖部位，用滤纸吸干表面水分，剪成1cm小段放入烧 杯中，杯中加入50ml蒸馏水，放入真空干燥器中，用抽气泵抽气8min抽出细胞间空气，立刻排尽真空罩的气体，玻璃棒搅拌，静置20min，用DDS-307A测量各样品电导率R1，再煮沸20min，杀死植物组织细胞，冷却至室温，测电导率R2。

相对电导率=R1/R2*100%     (2-3)

2.2.5 苗木芽休眠状态的测定

有丝分裂指数法。

2.2.6 苗木病菌感染状况的调查

选取在低温高湿库贮藏的1000株砧木和嘎啦苗木，每15d 统计苗木真菌微生物感染率。

苗木根系真菌微生物感染率=被感染苗木数量/调查苗木总数量

2.2.7 数据处理

本试验采用Excel软件统计处理数据；采用23.0 SPSS进行相关性分析，origin进行图表绘制。

第三章 结果与分析

3.1 不同贮藏方式对苗木含水量的影响

图3-1(a)表明在不同贮藏方式下嘎啦苗木相对含水量贮藏增加相对含水量呈现先 升高后降低的趋势，不同贮藏方式下苗木相对含水量无显著差异，贮藏90d各处理相对含水量均开始降低，贮藏105d新高脂膜处理苗木相对含水量高于其他三组，图3-1(b) 贮藏期间砧木相对含水量也呈现先升高后降低的趋势，贮藏期间新高脂膜和抗蒸腾剂处 理苗木相对含水量略高于其他两个处理。

3.2 不同贮藏方式对苗木可溶性糖含量的影响

从图3-2(a)可以看出嘎啦苗木可溶性固形物含量在贮藏期间呈现先增加后减少的 趋势。贮藏60d，苗木可溶性糖含量达到最高，G4组苗木可溶性固性为129.36mg/g，早贮藏60d后四组苗木可溶性固形物含量开始降低。在贮藏105d后四组处理苗木可溶性固形物含量低于贮藏前苗木可溶性固形物含量。贮藏期间各处理之间无显著性差异。与图 3-2(a)相似，图3-2(b)贮藏期间砧木可溶性固形物含量呈现先增加后降低的趋势，但砧木四组处理可溶性糖含量最高值出现在贮藏45d，可溶性固形物最高组G3含量为133.71 mg/g，在贮藏105d时，G1､G2､G3和G4组砧木可溶性固形物含量分别为121.54mg/g､120.44mg/g､119.13mg/g和119.77mg/g，低于贮藏前砧木可溶性固形物含量。贮藏期间各处理之间无显著性差异。

3.3 不同贮藏方式对苗木根系电导率的影响

由图3-3(a)可知贮藏期间四组处理嘎啦苗木根系相对电导率逐渐升高，不同贮藏 时期四组处理嘎啦苗木相对电导率呈现显著性差异。其中贮藏45d和60d时，G2处理嘎啦苗木根系相对电导率显著高于G1组处理(p<0.05)，贮藏75d后，G2处理苗木根系相对电导率显著高于G1和G3处理(p<0.05)，到贮藏105d，四组处理苗木相对电导率率达到最高分别为58.24%、61.28%、56.35%和60.57%。与图3-3(a)相同，图 3-3(b)砧木根系电导率贮藏期间也逐渐升高，不同处理之间存在差异性，其中贮藏75d，G2和G4组处理砧木根系相对电导率显著高于其他两个相对电导率(p<0.05)，从贮藏90d起，处理G1砧木相对电导率开始高于其他三组。

3.4 不同贮藏方式对苗木根系活力的影响

由图3-4(a)可知，贮藏期间不同处理嘎啦苗木根系活力具有显著性差异，贮藏60d，新高脂膜和湿锯末处理组根系活力显著高于其他两个(p<0.05)，贮藏105d，新高脂膜处理根系活力显著高于抗蒸腾剂和高湿冷藏处理苗木，且四组处理根系活力高于贮藏前的苗木根系活力。图3-4(b)贮藏 60d和105d，新高脂膜和湿锯末处理组根系活力显著高于其他两个(p<0.05)。

3.5 贮藏方式对苗木芽休眠状态的影响

图3-5(a)表明苗木在冷藏期间，两种苗木的有丝分裂指数呈现先降低后逐渐升高的趋势，且贮藏前和贮藏期间砧木的芽有丝分裂指数高于嘎啦苗木，砧木芽有丝分裂指数在贮藏45d和60d内的半个月时间里接近零或等于零，随后缓慢升高，在贮藏105d达到0.32接近贮藏前有丝分裂指数。嘎啦苗木在贮藏前一个月有丝分裂指数快速下降到原来的0.17%，到贮藏60d有丝分裂指数为0，随后同样开始缓慢升高，到105d达到0.57。

图3-5（b）表明贮藏15d，冷藏高湿的嘎啦苗木有丝分裂指数快速下降到0.16，并与贮藏30d到75d苗木有丝分裂指数达到或接近0，随后开始缓慢升高到贮藏105d的0.31，砧木有丝分裂指变化规律同嘎啦苗木相似，在贮藏30d到75d有丝分裂指数为0，随后缓慢升高。同图3-5(a)不同，图3-5（b）苗木芽有丝分裂指数为零或接近零的持续时间为两个月，且贮藏105d指数虽升高但较小。

3.6 低温高湿贮藏期间苗木生理变化

图3-6（a）显示低温高湿期间，苗木根系TTC含量呈现先增加后降低的趋势，在贮藏45d苗木活力达到最高值后逐渐下降，砧木苗木相对含水量在贮藏期间也呈现先升高后降低的趋势，由于贮藏环境湿度较大，到贮藏105d 苗木相对含水量整体没有减少。苗木可溶性固形物贮藏期间逐渐降低，到贮藏105d苗木可溶性糖含量甚至低于贮藏前苗木可溶性糖含量。值得注意的是贮藏期间苗木根系相对电导率和病菌感染率持续增加，两者之间相关性达到0.967，这可能是导致苗木后期根系TTC下降的原因。

图3-6(b)显示嘎啦苗木生理指标变化复杂，苗木可溶性固形物在贮藏75d后开始升高，苗木根系TTC到贮藏后期开始降低，苗木相对含水量与砧木相似贮藏期间整体变化较小，与图3-6（a）相同贮藏期间嘎啦苗木根系电导率和病菌感染率逐渐升高，表现出较高的相关性。