一种优质多花黄精种苗繁育的方法

（转载《怀春计科研成果》第二卷第59页）

(19) 中华人民共和国国家知识产权局

(12) 发明专利

               (10)授权公告号 CN 111937703 B

                   (45)授权公告日 2022.08.26

（21）申请号  202010857596.2

（22）申请日 2020.08.24

（65）同一申请的已公布的文献号    

申请公布号  CN 111937703 A

（43）申请公布日 2020.11.17

（73）专利权人 三明市农业科学研究院

地址  365500 福建省三明市沙县区琅口镇柱元村

专利权人  三明市沙县新鑫中药材有限公司

（72）发明人 罗晓锋 周建金 叶炜 廖承树 乔锋 肖庆良 任秉桢

（74）专利代理机构 福州盈创知识产权代理事务所（普通合伙）35226

专利代理师  徐小伍

（51） Int.Cl.

A01G 22/25(2018.01)

A01H 4/00(2006.01)

审查员  田莉

                          权利要求书1页 说明书4页

（54） 发明名称

一种优质多花黄精种苗繁育的方法

（57） 摘要

一种优质多花黄精种苗繁育的方法，它主要包括以下步骤：1）优质试管苗制备、2）试管苗炼苗、3）移栽前准备、4）试管苗移栽、5）水肥管理、6）病虫害防治、7）遮阴管理。本优质多花黄精种苗繁育的方法设计理想，从优质试管苗制备、试管苗炼苗、移栽前准备、试管苗移栽、水肥管理、病虫害防治以及遮荫管理等方面进行研究，以提供优质多花黄精种苗繁育的方法，提高了试管苗

成活率与抗病性，节约劳动力，缩短育苗周期，提高多花黄精种苗的品性，满足优质黄精种苗的规模化生产。

权利要求书

1. 一种优质多花黄精种苗繁育的方法，其特征在于，它包括以下步骤：

a)优质试管苗制备：选取多花黄精健壮的地下根茎作为外植体经过预处理、培养基多次培养制得优质试管苗备用；该外植体预处理包括对外植体进行清洗、切余料，具体地操作为：将多花黄精地下根茎用水刷洗干净，去掉叶片和根系，切去周围多余的根茎，剥去芽体上能剥掉的苞片，取中间的带芽根茎块，该带芽根茎块的体积约1 .0cm×1 .0cm×0 .5cm；所述优质试管苗制备的培养基包括依次对外植体进行培养的增殖壮苗培养、分化培养基以及生根培养基，该增殖壮苗培养基为：MS＋1 .0mg/L 6－BA＋0 .5mg/L NAA＋糖90g/L；所述分化培养基为：MS＋1 .0mg/L 6－BA＋0 .5mg/L NAA＋0 .2mg/L IBA＋糖30g/L；所述生根培养基为：MS＋1 .0mg/L 6－BA＋0.5mg/L NAA＋0.2mg/L IBA＋活性炭0.5g/L＋糖30g/L；

b)试管苗炼苗：将盛有试管苗的试管瓶移至常温大棚炼苗60‑90天后，再打开试管瓶的瓶盖，进行炼苗2‑4天，试管苗即可取出；

c)移栽前准备：包括对试管苗处理、移栽时间的确定以及基质配比的筛选，所述试管苗处理方式为：用代森锰锌对试管苗进行浸泡18‑22分钟，待种；移栽时间的确定：选择当年的11月份以后至次年1月份前下种；基质选用泥炭、沙子和黄土进行混合制得，该泥炭、沙子和黄土按照1:1:1比例配成；基地用耙细整平，用扣板作边，木桩固定，做成育苗畦，再填入配好的基质后整平；

d)试管苗移栽：尽量均匀地将试管苗撒播在畦上，株行距1 .5-2 .0cm x 1 .5-2 .0cm ,再在试管苗上方均匀撒入基质土，厚度1 .5-2cm，最后用松针覆盖，厚度0 .8-1 cm；冬季寒冷季节，在畦上盖上一层稻草保温，来年出苗前掀去；试管苗移栽的条件选择带有智能水帘风机的温室大棚内，温度控制在25±2℃；

e)水肥管理：移栽后浇一次定根水，浇水到浸入土壤10公分左右即可，之后采用安装喷灌的方式1周浇一次水,试管苗出苗后，用1000倍液N：P：K=15:15:15的复合肥，春季一般一周浇一次液肥，无需浇水,夏秋季一周浇一次水和一次肥，直到倒苗；

f)病虫害防治：初次出苗后，每天喷一次根大灵，连续3次，增强叶面光合作用和抗病能力；虫害多以蚜虫为主，在试管苗出苗期和齐苗期打两次吡虫啉，防治蚜虫；病害防治采取以菌治菌为原则，将木霉菌、芽孢杆菌制成1:1的混合生防菌株，每隔30d‑45d喷施一次，施用浓度控制在5×10^6cfu/mL-8×10^6cfu/mL之间；

g)遮荫管理：试管苗出苗前和倒苗后、春季和阴天，均无需遮荫，从夏季到倒苗前，需遮一层50%的遮阳网。

2.如权利要求1所述的一种优质多花黄精种苗繁育的方法，其特征在于：所述步骤b）之后还需要进行试管苗缓苗：将试管苗取出并洗净其表面的琼脂，移栽到缓苗培养基质中并且温度控制在12～22℃遮荫条件下缓苗8～12天后备用；所述缓苗培养的基质由粗砂、珍珠岩和草灰组成。

一种优质多花黄精种苗繁育的方法

说 明 书

技术领域 

[0001]  本发明涉及植物组织培养和栽培技术，具体地说是指一种通过组培和配套驯化栽培技术获得优质多花黄精种苗的方法。 

背景技术 

[0002]  多花黄精（Polygonatum cyrtonema Hua）系百合科黄精属药用植物，其根茎作中药黄精用，主要含有糖类、甾体皂苷、黄酮及葸醌类化合物、生物碱、强心苷、木脂素、维生素和多种对人体有用的氨基酸及微量元素等，具有延长寿命抗衰老、影响心血管系统、调节免疫能力、抗炎抗病原微生物、抗疲劳、提高学习记忆力、抑制肿瘤细胞等作用，且安全无毒、无致突变性。随着人们对黄精药理、药化研究的逐步深入，黄精在临床应用、保健品、食品、化妆品及观赏方面等方面的应用越来越广泛。

[0003]  多花黄精在我国南方的一些地区有零散栽培，其主要靠根茎的无性生殖和种子进行繁殖，但由于繁殖系数低和种子繁殖周期长速度慢，无法提供大量种源，因而大面积种植受到限制。此外，长期无性生殖易造成种质性状退化，影响着品种的遗传稳定性。近年来，随着黄精的需求量与日俱增，野生资源已远不能满足需要，人工栽培是解决其问题的主要途径，而优质种苗成为人工栽培的瓶颈。现有也有一些关于多花黄精试管苗繁殖技术的报道，能实现繁殖出多花黄精试管苗，但是整体繁殖方法还是不够理想。试管苗与种子繁殖或与常规根茎的无性繁殖方法相比，优质多花黄精试管苗快速繁殖方法不受自然气候条件的约束、提高其品性、增加繁殖系数，缩短培育周期，大规模生产优质试管苗。种子繁殖实生苗至少需要培育3年才能达到生产用苗标准，而优质试管苗只需培育2年就可达到生产用苗标准，使用优质试管苗至少可缩短一年栽培周期。因此，建立和完善优质多花黄精种苗繁育体系成为当前生产上急需解决的问题，亦是保护和持续利用野生种质资源的主要措施之一。

发明内容

[0004]   本发明提供了一种优质多花黄精种苗繁育的方法，其目的在于克服现有多花黄精栽培方法不够理想，难以满足多花黄精试管苗的规模化生产需求等缺陷。

[0005]  一种优质多花黄精种苗繁育的方法，它包括以下步骤：

[0006]  a）优质试管苗制备：选取多花黄精健壮的地下根茎作为外植体经过预处理、培养基多次培养制得优质试管苗备用。

[0007]  b）试管苗炼苗：将盛有试管苗的试管瓶移至常温大棚炼苗60-90天后，再打开试管瓶的瓶盖，进行炼苗2‑4天，试管苗即可取出。

[0008]  c）试管苗缓苗：将试管苗取出并洗净其表面的琼脂，移栽到缓苗培养基质中并且温度控制在12～22℃遮荫条件下缓苗8～12天后备用；所述缓苗培养的基质由粗砂、珍珠岩和草灰组成。

[0009]  d）移栽前准备：包括对试管苗处理、移栽时间的确定以及基质配比的筛选，所述试管苗处理方式为：用代森锰锌对试管苗进行浸泡18-22分钟，待种；移栽时间的确定：选择当年的11月份以后至次年1月份前下种；基质配比的筛选：基质选用泥炭土和有机肥混合制得，该基质按照泥炭土：有机肥=5:1比例配成；基地用耙细整平，用扣板作边，木桩固定，做成育苗畦，再填入配好的基质后整平。

[0010]  e）试管苗移栽：尽量均匀地将步骤c）中试管苗撒播在畦上，株行距1 .5-2 .0cm x1 .5-2.0cm ,再在试管苗上方均匀撒入基质土，厚度1 .5-2cm，最后用松针覆盖，厚度约0 .8-1cm。

[0011]  f）水肥管理：移栽后浇一次定根水，浇水到浸入土壤10公分左右即可，之后采用安装喷灌的方式1周浇一次水。试管苗出苗后，用1000倍液N：P：K=15:15:15的复合肥，春季一般一周浇一次液肥，无需浇水。夏秋季一周浇一次水和一次肥，直到倒苗。

[0012]  g）病虫害防治：初次出苗后，每天喷一次根大灵，连续3次，增强叶面光合作用和抗病能力；虫害多以蚜虫为主，在试管苗出苗期和齐苗期打两次吡虫啉，防治蚜虫；病害防治采取以菌治菌为原则，将木霉菌、芽孢杆菌制成1:1的混合生防菌株，每隔30d-45d喷施一次，施用浓度控制在5×10^6cfu/mL-8×10^6cfu/mL之间。

[0013]  h）遮荫管理：试管苗出苗前和倒苗后、春季和阴天，均无需遮荫，从夏季到倒苗前，需遮一层50%的遮阳网。

[0014]  进一步地说，所述步骤a）中所述优质试管苗制备的培养基包括依次对外植体进行培养的增殖壮苗培养、分化培养基以及生根培养基。

[0015]   进一步地说，所述步骤e）中试管苗移栽的条件选择带有智能水帘风机的温室大棚内，温度控制在25±2℃。

[0016]  由上述对本发明的描述可知，和现有技术相比，本发明的优点在于：本优质多花黄精种苗繁育的方法设计理想，从优质试管苗制备、试管苗炼苗、移栽前准备、试管苗移栽、水肥管理、病虫害防治以及遮荫管理等方面进行研究，以提供优质多花黄精种苗繁育的方法，提高了试管苗成活率与抗病性，节约劳动力，缩短育苗周期，提高多花黄精种苗的品性，满足优质黄精种苗的规模化生产。本优质试管种苗与种子实生苗和野生种茎相比，组织快繁可有规模有计划的生产试管苗，不受季节与气候的影响。本优质多花黄精种苗繁育方法的水肥管理方式，保湿保肥，试管苗成活率可以高达90%以上，泡药后，提高试管苗抗病性，试管苗抗病性更强。本优质多花黄精种苗繁育方法采用撒播的方式，大大减少的种植时间，节省劳动力，提供劳动效率。本优质多花黄精种苗繁育方法，缩短育苗周期，与种子需种3年才能达到种茎标准（块茎直径2cm以上），试管苗只需1 .5-2年的时间，至少缩短1年的育苗周期。如图1所示，优质组培生根苗的块茎比一年生种子苗更壮。如图2所示，二年生的优质种苗已达到种茎标准。本优质多花黄精种苗繁育方法能提高黄精种苗的品性，与实生苗和野生种茎相比，试管苗有品种一致、种苗整齐、质量稳定等优点。

附图说明

[0017]  图1为本发明中优质试管苗的效果图。

[0018]  图2为本发明中优质试管苗炼苗前和优质试管苗炼苗后之间对比的效果图，其中左边的试管瓶为炼苗后的优质试管苗，右边的试管瓶为炼苗前的优质试管苗炼苗。

[0019]  图3为本发明中2年生组培苗和常规2年生种子苗之间对比的效果图。

具体实施方式

[0020]  一种优质多花黄精种苗繁育的方法，它包括以下步骤：

[0021]  a) 优质试管苗制备：选取多花黄精健壮的地下根茎作为外植体经过预处理、培养基多次培养制得优质试管苗备用，可参考说明书附图1；所述培养基包括依次对外植体进行培养的增殖壮苗培养、分化培养基以及生根培养基。

[0022]  b) 试管苗炼苗：将盛有试管苗的试管瓶移至常温大棚炼苗60‑90天（最佳天数为85天）后，再打开试管瓶的瓶盖，进行炼苗2‑4天（最佳天数为3天），试管苗即可取出，取苗时，用镊子轻轻将芽体取出，培养基清洗干净，水分沥干，备用，可参考说明书附图2。

[0023]  c) 试管苗缓苗：将试管苗取出并洗净其表面的琼脂，移栽到缓苗培养基质中并且温度控制在12～22℃遮阴条件下缓苗8～12天后备用；所述缓苗培养的基质由粗砂、珍珠岩和草灰组成。

[0024]  d) 移栽前准备：包括对试管苗处理、移栽时间的确定以及基质配比的筛选，所述试管苗处理方式为：用代森锰锌对试管苗进行浸泡18‑22分钟，待种；移栽时间的确定：选择当年的11月份以后至次年1月份前下种，这段时期天气凉，容易保湿，试管苗成活率能高达90%以上，苗长势良好；基质配比的筛选：基质选用泥炭土和有机肥混合制得，该基质按照泥炭土：有机肥=5:1比例配成；基地用耙细整平，用扣板（高30 cm，长3m）作边，木桩固定，做成

育苗畦（宽60cm），再填入配好的基质（高8‑10cm），整平。

[0025]  e) 试管苗移栽：尽量均匀的将步骤c)中试管苗撒播在畦上，株行距1 .5-2 .0cm x1 .5-2 .0cm（如2 .0cm x 2 .0cm）,再在试管苗上方均匀撒入基质土，该基质土厚度约1 .5-2cm，最后用松针覆盖，该松针厚度约0 .8-1 cm，冬季寒冷季节，在畦上盖上一层稻草保温，来年出苗前掀去，与传统一棵一棵种植相比，采用撒播的方式，大大减少的种植时间，节省劳动力，提供劳动效率，而且苗长势更好。试管苗移栽的条件选择带有智能水帘风机的温室大棚内，温度控制在25±2℃、散光培养，光照强度4000lx。

[0026]  f) 水肥管理：移栽后浇一次定根水，浇水到浸入土壤10公分左右即可，之后采用安装喷灌的方式1周浇一次水。试管苗出苗后，用1000倍液N：P：K=15:15:15的复合肥，春季一般一周浇一次液肥，无需浇水。夏秋季一周浇一次水和一次肥，直到倒苗。

[0027]  g) 病虫害防治：初次出苗后，每天喷一次根大灵（1000倍液）（可使药材主根更粗壮，须根旺盛，高产优质），连续3次，增强叶面光合作用和抗病能力；虫害多以蚜虫为主，在试管苗出苗期和齐苗期打两次吡虫啉，防治蚜虫；病害防治采取以菌治菌为原则，将木霉菌、芽孢杆菌制成1:1的混合生防菌株，每隔30d‑45d喷施一次，施用浓度控制在5×10^6cfu/mL‑8×10^6cfu/mL之间。

[0028]  h) 遮阴管理：试管苗出苗前和倒苗后、春季和阴天，均无需遮荫，从夏季到倒苗前，需遮一层50%的遮阳网。

[0029]  i) 拔草管理：定期拔草，切勿等草长大了再拔，这样拔时容易伤及试管苗根系，试管苗倒苗后，要及时把枯叶清理。通过本方法制得2年生组培苗和常规2年生种子苗之间对比的效果图，可参考说明书附图3。

[0030]  上述步骤a)优质试管苗制备，具体地说，它包括以下步骤：A）外植体的选取及预处理：选取当年的9‑10月份选取栽种2‑3年的多花黄精健壮的地下根茎作为外植体；该外植体预处理包括依次对外植体进行清洗、切余料以及消毒，具体地操作为：将多花黄精地下根茎（即外植体）用水刷洗干净，去掉叶片和根系，切去周围多余的根茎，剥去芽体上能剥掉的苞片，取中间的带芽根茎块，该带芽根茎块的体积约1 .0cm×1 .0cm×0 .5cm；再将带芽根茎块用流动的自来水冲洗1-2小时，将其晾干；再将其置于超净工作台上用75％的酒精浸泡15s，无菌水冲洗2-4次后，再投入0 .1％的升汞中，不停摇晃，持续8-10min后取出，再用无菌水冲洗5-8次，最后用无菌滤纸将无菌水吸干备用。

[0031]  B）增殖壮苗培养：将消毒处理过的带芽根茎块用解剖刀削去芽顶，再将其接入增殖壮苗培养基上进行培养，10天后，根茎周围膨大，长出愈伤，后并陆续冒出芽点，直至块茎膨大、芽体粗壮以及块茎颜色变深得到一号根茎块；在增殖壮苗培养基上大概培养42‑47天（最佳天数为45天）；该增殖壮苗培养基为：MS＋1 .0mg/L 6－BA＋0 .5mg/L NAA＋糖90g/L，该增殖壮苗培养基的pH值控制在5 .5－5 .7（最佳pH值5 .6）；该增殖壮苗培养基的特点：能有效的抑制带芽根茎块的抽叶，芽体休眠，不会抽叶，而且去除了顶端优势，营养集中供给根茎，因此根茎膨大速度快。

[0032]  C）分化培养：将一号根茎块进行分切成体积均匀的一号单元根茎块（体积约1 .0cm×1 .0cm×0 .5cm），再一号单元根茎块将接入分化培养基中培养，7天后芽块周围膨大，周围冒出许多芽体，直至芽体伸长抽出叶子得到二号根茎块；该分化培养基为：MS＋1 .0mg/L6－BA＋0 .5mg/L NAA＋0 .2mg/L IBA＋糖30g/L，该分化培养基的pH值控制在5 .5－5 .7（最佳pH值5 .6）；所述二号根茎块用解剖刀削去芽点，切成0 .5cm×0 .5cm的二号单元根茎块接入上述增殖壮苗培养基进行循环培养数代，即可在短时间内得到大量的二号根茎块（即优

质瓶苗）。该分化培养基的特点：根茎生长速度快，芽体得以伸长抽出叶子。

[0033]  D）生根培养：将二号根茎块进行分切成体积均匀的三号根茎块（体积约1 .5cm×1 .5cm），并且确保每块三号根茎块上至少有1个健壮芽以上根茎，将其转接到生根培养基培养，即得到本优质试管苗。该生根培养基为：MS＋1 .0mg/L 6－BA＋0 .5mg/L NAA＋0 .2mg/LIBA＋活性炭0 .5g/L＋糖30g/L，该生根培养基的pH值控制在5 .5－5 .7（最佳pH值5 .6）。该生根培养基的特点：能得到健壮的多花黄精优质试管苗，具体可参考说明书附图1。

[0034] 实施例二

[0035] 本实施例和实施例一的实施方式基本相同，不同之处在于：所述步骤d)移栽前准备：所述基质配比的筛选：基质选用泥炭、沙子和黄土进行混合制得（该泥炭、沙子和黄土按照1:1:1比例配成）。基地用耙细整平，用扣板（高30 cm，长3m）作边，木桩固定，做成育苗畦（宽60cm），再填入配好的本基质（高8‑10cm），整平。采用泥炭土、按照1:1比例配成的黄土+沙子、田园土、按照1:1:1比例配成泥炭+沙子+黄土和按照3:1比例配成的泥炭+沙子作为基质进行配比试验（2019年3月13号-10月13号移栽，重复3次，2020年4月25号统计）泥炭土成活率76 .7%、56 .7%、66 .7%，平均成活率为66 .7%；黄土+沙子=1:1成活率76 .7%、60 .0%、73 .3%，平均成活率为70 .0%；田园土成活率20 .0%、16 .7%、20 .0%，平均成活率为18 .9%；泥炭+沙子+黄土=1:1:1成活率90 .0%、83 .3%、86 .7%，平均成活率为86 .7%；泥炭+沙子=3:1成活率73 .3%、66 .7%、70 .0%，平均成活率为70%。综上可以看出泥炭+沙子+黄土=1:1:1的成活率最高，平均达86.7%。

[0036] 上述仅为本发明的具体实施方式，但本发明的设计构思并不局限于此，凡利用此构思对本发明进行非实质性的改动，均应属于侵犯本发明保护范围的行为。